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11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的

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11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的篇一

遗传学实验果蝇的观察

实验一 果蝇的性状观察和饲养管理

一、实验目的

1.了解果蝇的生活习惯

2.掌握果蝇饲养管理的方法

3.学习鉴定果蝇的雌雄性别和某些遗传性状

二、 实验原理

1. 果蝇的生活区域及培养条件

果蝇(fruit fly,vinegar fly )广泛存在于全球温带及热带气候区,在果园、菜市场等地皆可见其踪迹,目前已发现1000多种。果蝇以酵母菌为主要食料,能发酵的水果或植物基质,都可用作果蝇的饲料。

2. 黑腹果蝇的特点

 生活史短,每12天左右即可完成一个世代;

 饲养容易,以玉米粉等做饲料就可以生长繁殖;

 繁殖能力强,每只受精的雌蝇可以产卵500个左右;

 突变型多,突变性状多,多数是形态变异,容易观察;

 染色体少、个体小,是一种很好的遗传学实验材料,是一种模式生物。

3. 果蝇的生活史

 卵:白色,椭圆形,长约 0.5mm,前端背面伸出一触丝,附着在食物上。

 幼虫:一龄——二龄——三龄,三龄体长4-5 mm,幼虫头尖尾钝,头上

有一黑色钩状口器。

 蛹:化蛹前三龄幼虫停止摄食,爬到相对干燥的瓶壁上,形成菱形的蛹,

形状由淡黄、柔软逐渐硬化为深褐色。

 成虫:刚羽化的果蝇虫体较肥大,体表呈半透明,颜色逐渐加深,硬化。

25℃时,从卵至成蝇需10天左右。

1.卵 2.一龄幼虫 3. 二龄幼虫

4.三龄幼虫 5.蛹 6.成虫

4. 果蝇雌雄性别的判断(具体的观察尚未操作)

此外,雄性前肢先端第二节有性梳,雌雄果蝇腹节数不同也可用于区分其性别。

5. 果蝇在遗传学研究中的重要地位

摩尔根提出基因在染色体上直线排列以及连锁交换定律,并于1933年被授予诺贝尔奖。1946年,摩尔根的学生,被誉为“果蝇的突变大师”的米勒,证明X射线能使果蝇的突变率提高150倍,因而成为诺贝尔奖获得者。

在近代发育生物学研究领域中,果蝇的发生遗传学独领风骚。1995年,诺贝尔奖再次授予三位在果蝇研究中辛勤耕耘的科学家。

三、实验材料

黑腹果蝇品系:野生型、突变型(三隐性、黑体)

四、实验器材及试剂

 器材: 培养箱、高压灭菌锅、电磁炉、解剖镜、搪瓷杯、玻棒、镊子、培养瓶、海绵 塞、滤纸、酒精棉球、毛笔、麻醉瓶、白纸板。

 试剂: 乙醚、酒精、丙酸、酵母粉、琼脂、玉米粉、白糖。

五、实验内容

1.果蝇的饲养管理

使用高温灭菌的培养瓶培养,酵母菌是果蝇的主要食物,凡能发酵的物质都可以用来培养,常用的为玉米饲料。

2.果蝇培养基配制

 清洁指管,盖上适当大小的瓶塞,置高压灭菌锅内,以121℃,1.5大气压消毒15分钟,

冷却备用。

 按配方称取培养基各组分。先取一半水加入琼脂于电磁炉上加热溶解,再加入蔗糖煮沸。  取剩余的水将玉米粉调成糊状边搅拌边加入到琼脂溶液中,煮沸。

 待稍冷后加入酵母粉和丙酸,充分调匀、分装(20 ml/管)。 附注:果蝇培养基配方:

玉米粉 11.2 克

蔗糖 8.9 克

1 克

1 克

100毫升 干燥酵母粉 琼脂 水

添加 0.8 ml丙酸作为防腐剂

3. 果蝇的转移(此部由实验室老师完成)

 搬移果蝇至新培养瓶 :

取一新培养瓶,将瓶塞略为松动,放置于右手侧,取欲转移的果蝇培养瓶置左手侧,左手握住瓶颈,两指轻扣瓶塞顶部,以右手轻拍瓶底使果蝇掉落于培养基表面,将培养瓶置于左手侧,拔起瓶塞以左手两指夹住瓶塞外端,再将置于右手侧之新培养瓶瓶塞拔起,以右手两指夹住瓶塞外端,以右手将新培养瓶倒扣于旧培养瓶上,再以左手握住两瓶口相接处,翻转使新培养瓶位于下方,然后以右手掌心轻拍新培养瓶瓶底,使果蝇掉落于新培养瓶瓶底,然后迅速盖上各瓶瓶塞。

 麻醉方法:(果蝇可用乙醚麻醉,以方便实验操作)

取一麻醉瓶,瓶口应与培养瓶大小相仿,使两瓶口相对,培养瓶在上,用手拍击培养瓶,使果蝇落入麻醉瓶内,迅速盖上瓶塞,滴加3滴乙醚于小管口中的棉花上,约一分钟左右果蝇倒卧于瓶底,即可将果蝇倒出进行操作。

注意:过度麻醉将导致果蝇死亡。

另外,在观察或计数过程中,如见果蝇翻身走动可将麻醉瓶口朝下,盖于果蝇上

方 待其麻醉后再移开。

4. 培养瓶的标记

用标签纸贴在培养瓶侧壁上,注明培养时间、培养果蝇的表现型、培养人姓名学号等信息,再将自己的6个培养瓶绑在一起用报纸包好放在指定地点。

六、实验思考

1. 叙述果蝇观察结果,通过对果蝇雌雄个体的鉴别,你认为哪几个特征在鉴别中是主要

的?

答:首先我们可以从体型的大小上对于性别有粗略的判断,但不很准确,其次,腹部背面的条纹形状数目用于判断性别比较快捷有效,雌果蝇为分明的五条黑色条纹,而雄果蝇三条且最后一条呈现明显的黑斑;

2. 叙述配制培养基时的注意事项。

注意事项:

1.为了使玉米充分溶解,要在琼脂和蔗糖煮沸之后再将糊状的玉米加到溶液中。

要在稍冷后加入酵母菌,以防高温杀死过多酵母菌,使培养基内酵母菌含量过低。

2.加入少量丙酸,以防止其他微生物的滋长。

3.待培养基凝固后,用酒精棉球(酒精含量不可过高)擦拭培养管内壁粘上的培养基,再用酒精棉球吸取水汽。

七.参考文献

1. 戴灼华、王亚馥、粟翼玟 《遗传学》 高等教育出版社,1999。

2. 南京大学生命科学院 《遗传学实验》 2009

11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的篇二

遗传学实验-果蝇杂交实验实验报告{11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的}.

传学设计性实验报告

实验名称 果蝇杂交实验 学 院 生命科学学院 专 业 生物技术 班级名称 学生姓名 学 号 任课教师

完成日期 2015年11月15日

教 务 处 制

1前言

1.1 实验目的{11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的}.

通过实验验证分离规律、自由组合规律、伴性遗传和连锁互换规律,掌握果

蝇杂交的实验技术和基因定位的三点测验方法,在实验中熟练运用生物统计的方法对实验数据进行分析。

1.2 实验原理

果蝇(fruit fly)是双翅目(Diptera)昆虫,属果蝇属(genus Drosophila),约有3000多种,我国已发现800多种。大部分的物种以腐烂的水果或植物体为食,少部分则只取用真菌,树液或花粉为其食物。以果蝇作为遗传学研究的材料,利用突变株研究基因和性状之间的关系已近一百年,至今,各种研究遗传学的工具已达完善的地步,果蝇对今日的遗传学的发展有其不可磨灭的贡献;从1980年初,Drs. C. Nesslein-Volhard和E. Weichaus以果蝇作为发育生物学的模式动物,利用其完备的遗传研究工具来探讨基因是如何调控动物体胚胎的发育,也带动了其它模式生物(线虫、斑马鱼、小鼠和拟南芥等)的研究,且有非常具体的成果。

通常用作遗传学实验材料的是果蝇。用果蝇作为实验材料有许多优点: ⑴饲养容易。在常温下,以玉米粉等作饲料就可以生长,繁殖。

⑵生长迅速。十天左右就可完成一个世代,每个受精的雌蝇可产卵400~500个,因此在短时间内就可获得大量的子代,便于遗传学分析。

⑶染色体数少。只有4对。

⑷唾腺染色体制作容易。横纹清晰,是细胞学观察的好材料。 ⑸突变性状多,而且多数是形态突变,便于观察。 果蝇的性别及突变性状的鉴别:

果蝇的每一体细胞有8个染色体(2n=8),可配成4对,其中3对在雌雄果蝇中是一样的,称常染色体。另外一对称性染色体,在雌果蝇中是XX,在雄蝇中是XY。

果蝇的雌雄在幼虫期较难区别,但到了成虫期区别相当容易。雄性个体一般较雌性个体小,腹部环纹5条,腹尖色深,第一对脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏,称性梳(Sex combs)。雌性环纹7条,腹尖色浅,无性梳。

实验中选用的果蝇突变性状一般都可用肉眼鉴定,例如红眼与白眼,正常翅与残翅等。

2 实验材料

2.1果蝇品系

正交:2# (雌) ×6#(雄) 反交:2# (雄) ×6#(雌) 2.2实验用具、药品

显微镜、培养瓶、棉塞、量筒、麦片、玉米粉、蔗糖、琼脂粉、丙酸、乙醚等

3实验方法

3.1、果蝇的饲养

3.1.1 培养基的配制(以100ml量为例) 70ml水 + 0.85g琼脂 + 7g蔗糖煮开至琼脂溶化加入麦片玉米糊(30ml冷水与8g麦

片玉米混匀) 煮开约5分钟,成粘稠的糊状 稍凉后加入1g酵母粉,0.4-0.5ml丙酸,混匀 分装,待培养基凝固后包上纱布

3.1.2 果蝇的生活史

果蝇的生活周期长短与温度有密切关系。一般来说,30℃以上温度能使果蝇不育或死亡,低温能使生活周期延长,生活力下降,饲养果蝇的最适温度为20~25℃。

生活周期长短与饲养温度的关系

活史如下:

成虫交配1天后产卵,1天孵化为一龄幼虫天

天后,成为三龄幼虫天后,成蛹 3.5-4.5天后,羽化成虫

羽化后的成虫一般要经过至少12小时才能交配,此时的成虫又称为处女蝇; 温度越低,生活周期越长,25℃平均10-12天一个世代;但超过30℃ 易出现变异;其生活习性:果蝇是以水果上的酵母为食,所以实验室内凡能发酵的基质都可作为果蝇的饲料。 3.2、果蝇杂交的流程

3.2.1 取原种培养,并标注清楚

3.2.2 7-8天后,出现较多黑色蛹时,把原种分离出来。 3.2.3 待羽化后,每隔8小时取一次处女蝇。

3.2.4 严格分离雌蝇与雄蝇,若雌蝇中混有雄蝇,则需要重新取处女蝇;若雄蝇中混有雌蝇,则除去雌蝇。

3.2.5 交换6号雄与2号雄,进行杂交,分别为:正交:2# (雌) ×6#(雄) 反交:2# (雄) ×6#(雌)

3.2.6 出现第一个蛹后,去除亲本,等待F1代成虫的出现 3.2.7 统计F1代性状 4 实验结果

表1 6# × 2#果蝇杂交F1实验结果 2#♀×6#♂ 2#♂×6#♀ ♀ ♂ ♀ ♂

红灰长白灰小 0 0 0 127 合 计 137 122 133 127

果蝇在25℃时,从卵到成蝇需10天左右,成虫可活26~33天。果蝇的生

5 结果分析

规定:眼色 W-w 翅型 M-m(长-小) Vg-vg(长-残) 5.1、性别比分析

根据表1实验数据,可知,通过正反杂交后,收集到果蝇F1代一共519只,雌雄比例是1.084;假设性别决定的方式为XY型。遗传流程为

♀XX x ♂XY

1/2XX 1/2XY

2

x(x

2

<x

2

0.05

,所以说明在0.05显著标准下理论值与实际值差异不显著。

20.05

=3.84)

5.2、眼色分析

红眼为显性,白眼为隐性。该等位基因位于性染色体X上。 遗传过程:亲本 2#XX♀x 6#XY♂(正交) 2#X

WW

w

W

ww

Y♂x 6#XX(反交)

↓ ↓ F1 1/2XX 1/2XY 1/2XX 1/2XY

2#♀与6#♂杂交产生F1代中,无论雌雄果蝇,均为红眼,而2#♂与6#♀杂交产生F1代中,雌果蝇均为红眼,雄果蝇均为白眼。

表3 眼色比X2检验

Ww WWww

x<x0.05,所以说明在0.05显著标准下理论值与实际值差异不显著。

(x

20.05

22

=3.84)

5.3、翅形分析

5.3.1长-残(Vg-vg)

长翅为显性,残翅为隐性。该等位基因位于常染色体上。

遗传过程:亲本2#vgvg♀x 6#VgVg♂(正交) 2#vgvg♂x 6#VgVg♀(反交)

↓ ↓

F1 Vgvg Vgvg

5.3.2长-小(M-m)

长翅为显性,小翅为隐性。该等位基因位于X染色体上。

遗传过程:亲本 2#XX♀×6#XY♂(正交) 2#XY♂×6#XX♀(反交)

MM

m

M

mm

F1 1/2XX1/2XY 1/2XX 1/2XY

2#♀与6#♂杂交产生F1代中,无论雌雄果蝇,均为长翅,而2#♂与6#♀杂交产生F1代中,雌果蝇均为长翅,雄果蝇均为小翅。

表4 翅形比X2检验

x<x0.05,所以说明在0.05显著标准下理论值与实际值差异不显著。

22

11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的篇三

遗传学实验常考题

遗 传 学 实 验 考 题

1、 固定植物材料的卡诺氏(Carnoy)固定液配方是什么? 配方:无水酒精3份:冰醋酸1份或无水乙醇6份,氯仿3份,冰醋酸1份 2、

3、 固定动物材料的卡诺氏(Carnoy)固定液配方是什么? 有丝分裂实验的原理是什么?

实验原理:有丝分裂是真核细胞分裂的一种常见方式,存在于所有的细胞当中。这一过程的特点是:染色体复制一次,分裂一次,结果形成两个核,分裂为两个细胞,每个核中含有二倍体的染色体,染色体数目不减半。

4、 有丝分裂实验的目的是什么?

实验目的:①了解动植物细胞有丝分裂全过程。

②掌握植物有丝分裂样品的制备方法,学会观察各 种有丝分裂的细胞

5、 制作植物有丝分裂染色体标本的基本步骤有哪些? 自来水浸泡蚕豆(1 至2天)——萌发3~4天——取根尖

(1~1.5cm)秋水仙素处理——卡诺氏固定液固定24小时 ,70%的酒精保存(4°C)(水洗)——0.1mol/L HCl 水解(60。C8至10分钟)——洗后用改良苯酚品红染色(20分钟)——压片法制片,观察(低倍到高倍)

6、 制作植物有丝分裂染色体标本时需用哪些工具、器皿? 用具:镊子,培养皿,温度计,温浴锅,刀片,载玻片,盖玻 片,吸水纸,显微镜等。

7、 制作植物有丝分裂染色体标本时需用哪些药品和染液? 盐酸,碱性品红,改良苯酚品红染色酒精,秋水仙素,卡诺氏固定液

8、 减数分裂实验的原理是什么?

实验原理:在动、植物有性生殖过程中,由一个二倍体到单倍体的减数分裂过程:动物的精巢分化出精母细胞,精母细胞减数分裂,形成单倍染色体的精子。对精母细胞分裂过程的观察,可用来了解动物生殖细胞的形成过程。

9、 减数分裂实验的目的是什么?

实验目的:①了解动植物细胞减数分裂全过程。{11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的}.

②掌握有减数裂样品的制备方法,学会观察各种减数分裂细胞。

10、 减数分裂的意义是什么?

为生物的变异提供了重要的物质基础。

保证了亲代与子代之间染色体数目的恒定性。

11、 减数分裂前期Ⅰ可分为几个时期

5个时期

12、 制作蝗虫减数分裂染色体标本的基本步骤有哪些?

捕捉蝗虫摘取蝗虫精巢(95%乙醇去脂)——卡诺氏固定液固定

1.5~2小时(4°C)——放入70%酒精中保存——改良苯酚品红染色15分钟以上(分离小管)——压片法制片,观察(低倍到高倍)

13、 制作蝗虫减数分裂染色体标本时需用哪些工具、器皿? 镊子、解剖针、改良苯酚品红液、载玻片、盖玻片、吸水纸、显微镜、

14、 制作蝗虫减数分裂染色体标本时需用哪些药品和染液? 固定液、乙醇、改良苯酚品红液、

15、 果蝇唾液腺染色体实验的目的是什么?

1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术,学习唾腺染色体的制片方法

2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征

16、 果蝇唾液腺染色体有哪些特点?

17、 幼虫期具有很大的唾腺细胞,其中的染色体是巨大的唾液腺染色体,唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开,经过许多次的复制形成约1000~4000拷贝的染色体丝,合起来达5nm宽,400nm长,比普通中期相染色体大得多,唾液腺染色体具有许多重要特征,为遗传学研究的许多方面,如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料

18、 制作果蝇唾液腺染色体标本时应选用几龄幼虫?

11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的篇四

遗传学实验整理

实验02、有丝分裂染色体制片及观察 原理2 步骤1 注意1

二、实验原理 2

有丝分裂是一个连续过程,可分为分裂间期和分裂期,分裂期又分为前期、中期、后期、末期。

植物细胞有丝分裂主要在根尖、茎间、芽的生长点、幼叶叶缘及茎间形成层等分生组织,将生长旺盛的植物分生组织经过取材、固定、解离、染色、压片等处理,就可以观察到植物细胞的有丝分裂现象。

由于植物根尖容易取材、操作方便,经常被用来进行植物细胞有丝分裂过程的观察:

①根尖取材容易,操作和鉴定也比其它器官与组织方便;

②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖,不受植物生长季节的影响和限制,并且可以大量获得;

③对于某些珍贵而又稀少的试验材料,取用自然条件下生长植株的根尖,比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多;

④采用实验室内种子发根,切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植,利于后续研究进行。

五、实验方法1

1.发根:①水培法②砂培法

取材:上午10:00~11:00;下午 4:00~ 5:00

2.预处理 :将剪下的根尖立即放入0.1%秋水仙碱水溶液中,以药液浸没根尖为度,处理3~4h。抑制和破坏纺锤丝的形成,使根尖细胞延迟其染色体的分离,增加中期分裂相,并使染色体分散于细胞中,以便观察计数。

3.固定

材料经预处理后用流水冲洗,然后投入卡诺液(3份甲醇:1份冰乙酸,现配现用)中固定20~24h,用95%的乙醇洗两次,转入70%乙醇中保存备用。 固定的目的是将材料迅速杀死,并使染色体形态、结构尽可能保持不变和便于染色。

4. 解离

常用酸解法:从70%乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗3min→吸水纸吸干→放入盛有适量1mol/L HCl,60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离10min。

5.染色与压片(改良石炭酸品红染色):

解离后材料水洗3min并吸干,取1/2个根尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂,滴加1~2滴染液,染色10~15min,将滤纸放在盖玻片上,用拇指用力压盖玻片,再用手固定住盖玻片,同时用铅笔的橡皮头在材料部位垂直轻敲几下,使材料分散均匀。

6.镜检

通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数,因此压片后要认真仔细地进行镜检。先在低倍镜下寻找有分裂相的视野,再用高倍镜仔细观察、记数或拍照。调节可变光栏与反光镜,使光线明暗合适,视场亮度适中。

注意观察有丝分裂全过程的染色体形态变化,找出染色体分散好的中期细胞进行染色体计数,对好的分裂图像作上标记,以便再观察。

七、注意事项 1

1.酒精和解离液都要清洗干净,并认真吸干,否则影响染色效果。

2.染色时间10分钟是个参考时间,应以实际染色效果判断,不太长也不能太短。

3.镊子敲打时,应用力均匀,开始不要太重,避免细胞挤压在一起。用力太轻不易使细胞处于同一平面, 故应适当控制敲打力度。

实验03、减数分裂染色体制片及观察

二、实验原理 2

分裂过程中染色体结构呈周期性变化,并在特定时期呈现稳定的形态特征,是进行染色体形态、结构与数目鉴定的有利时期。

。每次分裂都可分为紧密衔接的前、中、后、末四个时期。前期Ⅰ变化最为复杂,分为细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。通过减数分裂所形成的细胞(或雌、雄配子), 其染色体数目只有体细胞的一半。

减数分裂过程中染色体出现同源配对、非姊妹染色单体片段交换、同源染色体相互分离等一系列独特行为,为远缘杂种的分析及三大遗传定律的论证等遗传研究提供了证据。

减数分裂细胞染色体制片多以高等动、在适当的时机采集动物精巢或植物花蕾(花序),经适当技术处理,压片就可在显微镜下观察到减数分裂过程。

五、实验方法 1 蝗虫精巢减数分裂装片

(1)取材:剪去翅膀,在翅基部后方的背端,仔细剪开体壁,可见上方两侧(第4~7背板之间)各有一团黄色团状块(精巢)。

(2)固定:卡诺氏固定液固定2~4小时,经95%酒精洗2~3次后,转入70%酒精保存。

(3)染色:夹取一小枚管状精巢,放置于载玻片上,滴加适量醋酸洋红(或改良品红液)染色10~

(4)压片:用解剖针挑取少量材料(一条精小管)到一张新载片上,加1滴新鲜染料或45%醋酸,拔碎,加盖玻片,复吸水纸压片。

(5)镜检。

减数分裂染色体装片的注意事项

2

实验04、人工诱发多倍体植物的鉴定

二、基本原理 1

它既可以有效地阻止纺锤体的形成,又不至于对细胞发生较大的毒害。因此,当细胞继续分裂后,可以使细胞的染色体数加倍。如果用秋水仙素处理植物的根尖,则在根尖分生区内可检测到大量染色体加倍的细胞;若处理植物幼苗的芽,则可以得到染色体加倍的植株。

四、操作步骤

1.生根:将搪瓷盘的盘口用线绳编织成许多网格,在盘内注人清水。把洋葱的鳞茎洗干净,用刀片将鳞茎上的老根削除,再把其放在搪瓷盘的网格上,使其生根部位恰好接触到水面,在25℃下培养几日至根尖长1.5-2cm。

2.秋水仙素处理:将搪瓷盘内的清水换成0.1%的秋水仙素水溶液,培养36-48小时,膨大时,将根尖取下,长度大约在1.5cm 左右,放入固定液中固定24h。于70%乙醇中保存。

3.酸解:从70%乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗3min→吸水纸吸干→放入盛有适量1mol/L HCl,60℃水浴保温的青霉素瓶中→解离10min。

4.染色:解离后材料水洗3min并吸干,挑取1/2滴加1~2滴染液,染色10~15min,压片。

5.压片: 敲打,或以拇指垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动),使材料分散压平,便于观察。

6.镜检: 经显微镜观察,找到染色体分散良好,染色体形态清楚的

实验05、果蝇的形态观察及其饲养

三、实验步骤

1)培养基的配制

果蝇以酵母菌为食,常采用发酵的培养基繁殖酵母菌来饲养果蝇。培养基常用玉米粉、米粉或香蕉配制,本实验采用玉米培养基。 配制时先将水分成两份:一份用于溶解琼脂和糖,另一份煮玉米粉,待两份分别溶解煮好后再合到一起煮沸,关掉火后再加入丙酸,这时的培养基很粘稠,要充分搅拌后再分装培养瓶。

待培养基冷却后,在培养基的表面洒上一层酵母粉,插上一块经灭菌后的滤纸片做为幼虫化蛹的干燥场所。

2)果蝇继代培养

将果蝇转移到新配制的培养基中繁殖。转移时要注意转移的手法,不要使果蝇从两个瓶口的接缝处飞出。一般用黑纸包住带有亲本果蝇的培养瓶,使其飞入带有新培养基的培养瓶。

果蝇的优点:

a、生活史短,20-25℃条件下完成一个世代需12-15天。b、繁殖率高,一对果蝇可产卵400-500只。c、饲养方便。d、突变率高。e、形态容易辨认。

2)果蝇的麻醉处理

在果蝇的性状观察、性别鉴定以及杂交亲本接种等操作中,应先将果蝇麻醉,使其保持安静状态。麻醉方法如下:

(1)准备一只与培养瓶口径相同的空瓶作为麻醉瓶,并配以脱脂棉塞。

(2)去掉培养瓶棉塞,立即与麻醉瓶口相对,培养瓶在上,一手稳住两瓶,另一手轻轻震拍培养瓶,使果蝇落入麻醉瓶中。

(3)滴数滴乙醚于麻醉瓶棉塞内,迅速将两瓶塞住,约30s,麻醉瓶内的果蝇即处于麻醉状态。 注意不能麻醉过度。若蝇翅与蝇体呈45º角翘起,表明麻醉过度,不能复苏而死亡。

(4)将麻醉后的果蝇放在白瓷板或白纸板上,用毛笔刷移动检查,根据需要用肉眼、放大镜或解剖镜观察。不再用的果蝇务必倒入死蝇盛留器中及时处死,防止品系间混杂。

3)果蝇的形态构造

头部:有一对复眼和一对触角。

胸部:有三对足,一对翅和一对平衡棒。

腹部:背面有黑色环纹,腹面有腹片,外生殖器在腹部末端,全身有许多体毛和刚毛。

4)成虫雌雄的鉴别

1

注意事项

1、配制培养基时要将玉米粉及琼脂和绵白糖要分开煮。

2、转移果蝇时要防止果蝇飞走。

3、麻醉果蝇时要掌握麻醉尺度,需要用活体时,不可以麻醉过度使果蝇致死。实验后不用的果蝇要及时处死,不可放飞。

实验06、07、08:果蝇的单双因子杂交、伴性遗传

二、实验原理: 分离定律:同源染色体上的等位基因分离 自由组合定律:非同源染色体上非等位基因的自由组合。

伴性遗传:性染色体的基因遗传行为与性别有关。1

五、实验步骤:2

1、选择处女蝇:放出并杀死培养瓶中的全部成蝇,然后羽化后未超过8小时的雌蝇即为处女蝇。

2、杂交:野生型和突变体果蝇杂交,正反交各做一瓶。23℃恒温培养。雌蝇2-3只,雄蝇5-7只。

3、移走亲本:待F1幼虫出现即可放掉亲本。

4、观察F1:观察F1的形态。

5、F1互交:在新培养瓶内,放入3-5对F1果蝇,培养。

6、移去F1:待F2幼虫出现即可放掉并处死F1果蝇。

7、观察F2:观察F2的形态后处死,连续观察统计数据。

8、数据处理及统计分析:分析实验结果与预期理论的符合程度。

果蝇杂交实验中,亲本果蝇的雌性必须是处女蝇,为什么?2

F1代自交时雌性果蝇可以不是处女蝇,为什么?如何操作可得到处女蝇?

答:①亲本果蝇的雌性必须是处女蝇,因为雌果蝇生殖器官有受精囊,可保存交配所得的大量的精子,能使大量的卵细胞受精。因此,在做果蝇杂交实验的时候,雌果蝇必须是处女蝇,保证实验结果的可靠性。

②F1代果蝇为亲本果蝇同一批次产出,理论上F1代的雌蝇都是处女蝇。

③雌果蝇自羽化开始10小时之内尚未成熟而无交配能力。选择处女蝇时,先把培养瓶中的老果蝇全部除去,收集10小时之内羽化出来的新果蝇,麻醉后用放大镜在百瓷板上将果蝇雌雄分开,这时得到的雌果蝇应该全部都是处女蝇。

如果要验证选取的处女蝇是否准确,先不要放入雄蝇,3天后看雌蝇是否产卵,如果产卵就不是处女蝇了。当证明确实是处女蝇的情况下再放入雄蝇,进行遗传杂交实验。

果蝇杂交试验正反交的区别(从F1 F2来答1):亦称互交,指在某一杂交之后,把先前用作母本的作为父本,先前用作父本的作为母本来进行的杂交 这二组杂交所产生的杂种之间一般并无不同,但在伴性遗传的性状则不是。白眼果蝇和野生型果蝇的杂交,如以白眼果蝇为母体,野生型果蝇为父本,在F1中雌性野生型和雄性白眼果蝇的出现比例为1∶1,可是在以野生型果蝇为母本,白眼果蝇为父本进行反交时,而F1则全都是野生型。、

果蝇单因子杂交重要步骤:1 选择亲本处女蝇 2 亲本交配完F1幼虫出现时放掉所有亲本

实验09、果蝇唾腺染色体的制备和观察

二、实验原理1

果蝇是双翅目昆虫,幼虫期具有很大的唾腺细胞,液腺染色体不断地进行自我复制而不分开,经过许多次的复制形成约1000~4000拷贝的染色体丝,合起来达5mm宽,400mm长,比普通中期相染色体大得多(约100~150倍),所以又称为多线染色体或巨大染色体。

这种染色体不同部位螺旋化程度不同,经染色后,呈现深浅不同,位置、宽窄及排列顺序都具有种的特异性,根据染色体各条臂带纹特征和各条臂端部带纹的特征能准确识别各条染色体。一旦染色体上发生了缺少、重复、倒位、异位等,可较容易地在唾腺染色体上观察出来。

五、实验步骤:1

三龄幼虫-----解剖------解离(1M HCl)2-3min------水洗3-4次-----染色-----压片观察照相

1.培养果蝇三龄幼虫

将果蝇放在营养丰富的培养基中,15℃~18℃下饲养,幼虫要生长肥大,才能获得较大的唾腺。

【培养要求:

①饲料松软,含水量较高,营养丰富,发酵良好(建议配方:玉米粉10g,红糖13g,琼脂1g,酵母粉2g,丙酸3~4滴,加蒸馏水100~120ml)。

②追加酵母液。在一龄幼虫出现后,将成虫移入另一培养瓶中,在饲料表面滴加低浓度的酵母液(2%~

4.5%),每天滴加1~2滴;2龄~3龄幼虫时期适当增加酵母液的浓度(约10%左右);滴加的量以覆盖在饲料表面薄薄的一层为宜。

③控制幼虫的密度。一般情况下,半磅牛奶瓶中10对成虫交配后在12h左右必须将成虫转移,一般要求每cm2培养基表面20~40只幼虫左右。

④低温培养:稍低的温度有利于幼虫的充分生长发育,一般15℃~18℃较为合适。】

2.取唾腺

挑选生长肥大的三龄幼虫放入表面皿中,用0.7%的生理盐水尽量洗去幼虫体表所沾附的培养基,然后将幼虫置载玻片上,滴1-2滴0.7%生理盐水,找到具有口器的头部(有一小黑点),用一手解剖针刺入(或压住)头部,将虫固定,另一手用摄子夹紧幼虫下半部(尾端1/3处),轻轻向两端拉开,唾腺随头部拉出。唾腺是一对透明的棒状腺体,外有白色的脂肪组织(不透明)。去除幼虫其它组织部分,并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。

移去虫体其余部份,用解剖针剔除附在唾腺一侧深色泡沫状的脂肪体。若载片上杂质较多,可用生理盐水适当冲洗,用吸水纸吸去多余的生理盐水。

注意:在整个剥离过程中,不能让载片上的生理盐水干涸,否则唾腺收缩而不易剥离;冲洗残渣和吸去多余水液时,要避免唾腺被吸水纸吸走。

3.解离

将剥好的唾腺移到载片中央,加一滴1 mol/L HCl于腺体上,解离2~3min使组织疏松,以便压片时细胞分散,染色体展开。

4.染色

用吸水纸吸去HCl,加1滴蒸馏水轻轻冲洗后,小心吸干。加1~2滴改良苯酚品红或其它染液,染色10~15min。

5.压片

染色完成后,盖上干净的盖片,并覆一层滤纸。将片子放在实验台上,用大拇指均匀用力压片。(注意不要使盖片移动。

出。

6.镜检

在低倍镜选择唾腺细胞多且染色体分散好的视野,换高倍镜仔细观察唾腺染色体的染色中心、染色体臂和横纹以及可能有的疏松区、裴氏环、或因易位而形成的十字形图象和因倒位而形成的倒位环等各种结构。

普通果蝇(2n=2x=8)唾腺染色体的特点表现在:各染色体着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的染色中心,第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈V形(中着丝粒),各有两臂,X染色体呈棒状,第Ⅳ对染色体呈粒状,观察时可见五条臂由染色中心向外蜿蜒伸展。

六、注意事项1

1. 一定加生理盐水,否则唾腺易干。

2. 将脂肪组织清除干净。

3. 水不可太多,否则幼虫会漂浮而且活跃。

4. 染色时间不可过长,否则背景也着色。

5. 压片时要揉,用力要均匀。

6. 染色完以后,将旧的染色液吸去,加新的染色液,再压片。

实验10、植物染色体组型分析

二、实验原理 1

染色体在有丝分裂中期表现出典型形态,是识别染色体个体性和研究整个细胞染色体组型的适宜时期。鉴别每条染色体是染色体组型分析的基础,它依靠如下4个形态学指标:

主缢痕:着丝点区域,不染色。

次缢痕:在某些染色体的一个或两个臂上,常有缢缩部位、染色较淡。

随体:某些染色体次缢痕末端所具有的圆形或略呈长形的突出体。通常在短臂一端。

⒈ 染色体长度,是识别染色体的重要指标

(1)绝对长度(单位μm):短臂(S)、长臂(L)及全长(S+L)。

(2)相对长度=

11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的篇五

遗传学实验讲义(16年修改)

实验一、果蝇的饲养与形态观察

一、果蝇简介

果蝇是在世界各地常见的昆虫,属于昆虫纲,双翅目,果蝇科,果蝇属。果蝇属有3000多种,我国已经发现800多种,遗传学研究中通常用的是黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。作为遗传学研究的材料,果蝇具有非常突出的优点,它形体小,生长迅速,繁殖率高,饲养方便,世代周期短,约12 d就可繁殖一代,突变性状多,染色体数目少,基因组小,实验处理十分方便,容易重复实验,便于观察和分析。果蝇的遗传学研究广泛而深入,尤其在基因分离、连锁、互换等方面十分突出,为遗传学的发展作出了突出的贡献。目前果蝇仍然是遗传学、细胞生物学、分子生物学、发育生物学等研究中常用的模式动物。

二、实验目的

1. 掌握果蝇的基本特征及鉴别雌雄果蝇的方法,熟悉常见突变型。

2. 了解果蝇生活周期特征及各阶段的形态变化。

三、实验材料

仪器设备:显微镜、指型管、毛笔。

药品与试剂:乙醚、玉米粉、酵母粉、蔗糖、丙酸。

四、实验内容和步骤

1. 生活周期的观察

果蝇的生活史:果蝇与家蝇是不同的种,是完全变态昆虫,其完整的生活周期可分为4个明显的时期,即卵、幼虫、蛹和成虫。用放大镜从培养瓶外即可观察到这四个时期,也可取出用立体解剖镜仔细观察。

果蝇的生活周期长短与温度关系很密切,低温使生活周期延长,生活力减低,高于30℃使果蝇不育甚至死亡。果蝇培养的最适温度为20~25℃,25℃培养条件下果蝇从受精卵到成虫约10 d,其中卵和幼虫期5 d,蛹4 d。成虫果蝇在25℃条件下约成活15 d。

卵:受精卵白色,椭圆形,腹面稍扁平,长约0.5 mm,在前端背面伸出一触丝,它能使卵附着在食物上。

幼虫:受精卵经24 h就可孵化成幼虫,幼虫经两次蜕皮到第三龄期体长可达4~5 mm。肉眼观察可见幼虫一端稍尖为头部,上有一黑色的钩状口器。

蛹:幼虫生活4 d左右即开始化蛹。化蛹前三龄幼虫停止摄食,爬到相对干燥的表面,如培养瓶壁,渐次形成一个菱形的蛹,起初颜色淡黄、柔软,以后逐渐硬化变成深褐色,此时即将羽化。

成虫:刚从蛹壳中羽化出来的果蝇,虫体较肥大,翅膀还未展开,体表也未完全几丁质化,所以呈半透明的乳白色。透过腹部体壁还可以观察到消化道和性腺。约1 h后,蝇体即

变为粗短椭圆形,双翅伸展,体色加深,如野生型果蝇初为浅灰,后变成灰褐色。

成虫果蝇羽化后8 h即可交配。雄果蝇的精子可贮存于雌果蝇的受精囊,以后逐渐释放到输卵管,雌蝇2 d后即开始产卵,最初几天每天可产50~70个,随后逐渐减少。

2. 果蝇的形态特征和常见突变的类型

果蝇的雌雄性别的鉴别

果蝇有雌雄之分,幼虫时很难区别,但成虫区别很容易。雄性的腹部环纹5节,末端钝而圆,颜色深。第一对足的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏,称性梳;雌性腹部环文7节,末端尖,颜色浅,跗节前端无黑色鬃毛性梳。雄性个体一般比雌性小。

一些常见的突变性状

果蝇的突变性状很多,已知的达几百种,并且随着研究的深入会发现或诱变产生更多的突变性状。果蝇的许多突变都是明显而且稳定的,大多是形态变异,容易观察。

3. 果蝇的麻醉的方法

对果蝇进行检查时,一般用乙醚进行麻醉,使其保持静止状态。由于果蝇对乙醚比较敏感,因此麻醉时应根据实验要求而定,作种蝇以轻度麻醉为宜,做观察时可深度麻醉,致死也可。麻醉程度是实验成功与否的关键步骤,麻醉不够,果蝇就会飞掉,麻醉过头又会杀死果蝇。果蝇翅膀外展45度角表示已经死亡。

麻醉的操作步骤如下:

1) 轻摇或轻拍培养瓶使果蝇落到培养瓶底部。

2) 右手两指取下培养瓶塞,迅速将麻醉瓶口与培养瓶口对接严密。

3) 左手握紧两瓶接口处, 倒转使培养瓶在上。

4) 紧握两瓶接口,使两瓶稍微倾斜,右手轻拍培养瓶将果蝇振落到麻醉瓶中。注意不要让培养瓶中的培养基掉入麻醉瓶中,如培养基已变得太稀而易脱落,可采用麻醉瓶在上,而用黒纸或双手遮住培养瓶,使果蝇趋光自动飞入麻醉瓶中。

5) 当果蝇进入麻醉瓶后,迅速分开,将两瓶各自盖好。然后再将麻醉瓶的果蝇拍到瓶底,迅速拔开塞子,在塞子上滴几滴乙醚,重新塞上麻醉瓶。

6) 观察麻醉瓶中的果蝇,约半分钟后果蝇便不再爬动,转动瓶子,果蝇在瓶壁上站不稳,麻醉就算成功了,即可倒在白瓷板上进行观察。

7) 果蝇麻醉状态通常可维持5~10 min,如果观察中苏醒过来,可进行补救麻醉,即用一平皿,内贴一带乙醚的滤纸条,罩住果蝇形成一临时麻醉小室。

4. 果蝇培养

将果蝇移入新培养瓶时,须将瓶横卧,并在培养基上薄博铺上一层玉米粉,然后接入5~10对果蝇,待果蝇清醒后,再把培养瓶竖起,以防果蝇粘在培养基上。

果蝇培养基

A:糖6.2 g,加琼脂0.62 g,再加水38 ml。煮沸溶解。

B:玉米粉8.25 g,加水38 ml,加热搅拌均匀。

A、B混和加热后成糊状后,加0.5 ml丙酸,充分混匀后,再加0.7 g酵母粉,搅拌均匀后,趁热分装至指型管中,每管约2 cm厚。{11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的}.

注意事项

分装时不要把培养基倒在瓶壁上。刚配制完的培养基放凉后在瓶壁上会有许多水滴,这时如果将果蝇放进去,水滴可能将果蝇的翅膀粘住。为避免发生此事,可将配好的果蝇培养基放置温箱内2~3 d,待水分蒸发后再使用,或用酒精棉球将瓶壁上的水分擦掉。

5. 实验交配

果蝇雌体生殖器官有受精囊,可保留交配所得的大量精子,能使大量的卵受精,因此在做品系间杂交时,雌体必须选用处女蝇。雌果蝇一般孵出8 h后才会交配,所以把老果蝇除去后,8 h内所收集到的雌蝇必定为处女蝇。由于雌蝇两天内不产卵,所以雄果蝇可以直接放到处女蝇培养瓶中。

实验二、果蝇唾腺染色体观察

一、实验原理

唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫,如

果蝇、摇蚊幼虫唾液腺中的巨大染色体,双翅

目昆虫的消化道细胞发育到一定阶段之后就不

再进行有丝分裂,而永久停留在分裂间期。但

随着幼虫的生长,唾液腺染色体仍不断地进行

自我复制而且不分开,经过多次的复制形成约

1000~4000拷贝的染色体丝,合起来直径达5

μm,长度达400 μm,比普通细胞中期染色体大

约100~150倍,所以称为多线染色体或者巨大

染色体。

唾腺染色体的另外一个特点是体细胞中同

源染色体处于紧密配对状态,这种状态称为“体

细胞联会”。在以后不断的复制中仍不分开,由

此成千上万核蛋白纤维丝结合在一起,紧密盘

绕。所以细胞中染色体只呈单倍数。黑腹果蝇的染色体数目2n=8,其中第II、第III染色体为中部着丝粒染色体,第IV和第I(X染色体)染色体为端着丝粒染色体。唾腺染色体形成图 果蝇有丝分裂中期染色体形态示意图

时,染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区聚于一起形成一个染色体中心,所以在光学显微镜下可见染色中心伸出6条配对的染色体臂,其中5条为长臂,1条为紧靠染色体中心的很短的臂。

唾腺染色体经染色后,呈现颜色深浅不同、疏密各异的横纹。这些横纹的数目、位置、宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。研究认为这些横纹与染色体的基因是有一定关系的。从其横纹分布特征可对物种的进化特征进行比较,而一旦染色体上发生了缺失、重复、倒位、易位等结构变化,也可较容易地在唾腺染色体上观察识别出来。{11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的}.

二、实验目的

1. 学习取出果蝇等幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。

2. 了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征。

三、实验材料

黑腹果蝇的三龄幼虫。这种材料既易饲养,又易取得唾腺,但为了得到更好的染色体标本,需要在20~25℃和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓、肥大,爬上管壁的三龄幼虫(就要化蛹了)做标本最佳。

四、实验器具和药品

用具:双筒解剖镜,显微镜,镊子,解剖针,载玻片,盖玻片,滤纸,绘图纸。 药品:果蝇培养基,苯酚品红,果蝇用生理盐水(NaCl 7.5g、KCl 0.35g、CaCl2 0.21g,顺次溶解于1000 ml蒸馏水中)。

配方Ⅰ:石碳酸品红(carbol fuchsin)

母液A:3 g碱性品红,溶解于100 ml的70%酒精中(此液可长期保存)。

母液B:取母液A10 ml,加入90 ml的5%石碳酸水溶液(两周内使用)。

石碳酸品红染色液:取母液B 45 ml,

加入6 ml冰醋酸和6 ml 37%甲醛。

配方Ⅱ:改良石碳酸品红

取石碳酸品红染色液2~10 ml,加入

90~98 ml 45%的醋酸和1.8 g山梨醇。

五、实验步骤

取一条三龄幼虫(往往已爬上培养瓶

壁),置于载玻片上,并加一滴生理盐水,

置双筒解剖镜下观察。首先熟悉幼虫具一

钝尾和一带黑色口器的尖头端。 在解剖镜

下用解剖针压住头部,压点尽可能靠头部

图 唾液腺分离示意图

口器处。 幼虫头部固定之后,再用另一针压住尾部(或用尖头镊子夹住),平稳快速一拉,使口器部分断开,体内各器官也从切口挤出,一对唾液腺也随之而出。唾液腺是对透明的香蕉状腺体,仔细观察可发现由一个个较大的唾液腺细胞组成。

分离的腺体可能伴有消化道和脂肪体。在载玻片上再加一滴生理盐水,用刀片或解剖针仔细剔除这些杂物,仅让腺体留下。用滤纸将多余生理盐水吸去,注意不要碰着腺体,以防吸走。然后滴上石碳酸品红,染色10 min左右。 染色后,盖上盖玻片,用滤纸轻轻吸去多余染料,然后平放在实验桌上,用大拇指压下盖片,用力适当即可获得染色体分散良好的制片,显微镜下观察。

实验三、果蝇的伴性遗传

一、实验原理

位于性染色体上的基因,其传递方式与位于常染色体上的基因不同,它的传递方式与雌雄性别有关,因此称为伴性遗传。果蝇的性染色体有X和Y两种,雌蝇为XX,是同配性别;雄蝇为XY,是异配性别。

二、实验目的

1. 记录交配结果和掌握统计处理方法。

2. 正确认识伴性遗传的正交、反交的差别。

三、实验材料

黑腹果蝇品系:

野生型果蝇:红眼

三隐性果蝇:白眼,此基因在X染色体上

四、实验用具和药品

1. 用具:毛笔,培养瓶,麻醉瓶,解剖镜

2. 药品:乙醚

3. 果蝇培养基:

A:糖6.2 g,加琼脂0.62 g,再加水38 ml,煮沸溶解。

B:玉米粉8.25 g,加水38 ml,加热搅拌均匀。

将A和B混合继续加热成糊状,加入0.5 ml丙酸和0.7 g酵母粉,混匀后分装到培养瓶中,约2 cm厚。

11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的篇六

遗传学实验课考题及答案

1.什么是减数分裂?主要有哪些特征?

减数分裂是一种特殊方式的细胞分裂,仅在配子形成过程中发生。这一过程的特点是:连续进行两次核分裂,而染色体只复制一次,结果形成四个核,每个核只含单倍数的染色体,即染色体数减少一半,所以称作减数分裂。另一个特点是前期特别长,而且变化复杂,包括同源染色体的配对、交换与分离等。

2.在哪些器官中可以观察到减数分裂?其中哪些是理想的实验材料?

在适当的时期采集植物的花蕾或动物的精巢。蚕豆花蕾,短脚斑腿蝗精巢。

3.在减数分裂制片时,选择合适的时期尤为重要,以蚕豆花蕾为例说明选择过程。

1)取已固定好的花序,按其花蕾大小,排列在小培养皿中2)拨开花蕾,先取中等大小的花蕾,取出花药,放在载玻片上3)加一滴醋酸洋红在花药上,用镊子夹碎花药壁,散出花粉母细胞4)加盖玻片,吸干周围染色液,用拇指适力下压5)镜检

4.在植物体的哪些部分可以观察到有丝分裂?其中哪些是制片比较理想的实验材料?

高等植物体细胞的有丝分裂,主要发生在茎尖、根尖、形成层等分生组织。洋葱根尖,蚕豆根尖。

5.什么是固定?我们所做的实验中,最常用的固定剂成分是什么?

固定是利用化学或物理的方法,使固定剂迅速透入组织和细胞,将其杀死,使蛋白质等物质变性,但在形态结构上尽量保持原来活着时的完整和真实状态,如细胞内染色体的分裂形态。同时固定更易于染色,可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。

卡诺固定液:3份无水乙醇,1份冰醋酸(现配现用)。

6.植物根尖染色体制片中,预处理的方法有哪些?作用是什么?

冰冻预处理,药物预处理。对标本进行预处理,固定染色体,使其停留在某一时期便于观察。

药剂处理:可以用作染色体预处理的化学药品,主要有生物碱、甙类、酸类及其他物质;最常用的 化学药品有秋水仙素、8-羟基喹啉及对二氯苯。

其作用是: ①阻止或破坏纺垂体微管的形成, 由于没有纺垂体的作用, 细胞有丝分裂过程, 被阻抑在细胞分裂中期阶段, 从而累计比较多的处于细胞分裂中期的染 色体图象。 ②促进染色体浓缩变短, 减少染色体之间相互缠绕重叠, 有利染色体的高度分散。 ③改变胞质粘度,促进染色体清晰,促进细胞质清洁。

7.植物根尖的解离主要有哪两种方法?简述其主要程序。

酸水解:一般采用盐酸解离。用盐酸解离因材料不用而不同。洋葱根尖用0.1mol/L盐酸在60°C下处理8min,蚕豆根尖用上述浓度温度时间延长15min。之后用70%酒精清洗几次,把残留的酸洗掉以免影响染色体着色。

酶处理:将固定的洋葱根尖用0.1mol/L的醋酸钠洗2次,然后放入酶液中(2%果胶酶和1%纤维素酶等量混合),在25°C恒温箱中处理1.5-2.5h,此时根尖较

柔软,将根尖取出,用0.1mol/L醋酸钠洗2次,再放入60°C0.1mol/L盐酸溶液中水解2min。最后用45%醋酸钠清洗根尖。

8.植物根尖压片过程要注意哪些方面?

取一染色的根尖臵于载玻片中央,用吸水纸洗去多余的溶液,加1滴新鲜的染液,盖上盖玻片后,在盖玻片上盖上一些吸水纸,应以左手的拇指和中指固定盖片的位臵,用铅笔或橡皮轻轻敲打,使细胞核染色体均匀分散。

9.植物根尖的解离有何目的?酸解离有何优点? 目的是使分生组织细胞之间的果胶质层水解掉,并使细胞壁软化,便于压片. 酸解离优点是较酶水解速度快,强度大,但用酸处理后,必须要用70%酒精清洗,把残留的酸洗掉,以免影响染色体着色。

10.低渗处理的作用是什么?试说明这种处理的关键步骤。

使红细胞解体,白细胞膨胀,染色体分散。

取5ML 37°C低温的0.075M KCl溶液加入离心管中,用滴管轻轻冲打成细胞悬液,放入37°C温箱中静臵20min。

11.果蝇唾腺染色体有哪些形态特征?

果蝇唾腺染色体比果蝇的其他体细胞染色体要长100-200倍,体积大上千倍,故有称巨大染色体。所有染色体的着丝点聚集在一起形成染色中心,因此唾腺染色体不但能进行配对,且所有染色体的着丝点聚集在一起形成染色中心,因此唾腺细胞染色体形态不是8条个别染色体,而是由染色中心向空间伸展的5条长臂和1条短臂构成。还表现出有明显的横纹,数目和空间排列是恒定的,代表着一些基因的位臵,具有种的特异性。

12.果蝇杂交试验中,亲本为何要用处女蝇?如何收集?

只有亲本是处女蝇才能保证雌蝇的生殖器里无精子,若非处女蝇则可能使果蝇后代不是所用雄蝇交配得来的。

一般来说,刚羽化出来的果蝇在12小时之内是不进行交配的,所以这段时间内选出的雌蝇即为处女蝇。为保险起见,可在羽化后10h内挑选。

13.秋水仙素处理为何可以诱发多倍体的形成?

秋水仙素的诱导作用在于阻止有丝分裂细胞纺锤丝的形成,但对染色体的结构和复制无显著影响。若浓度适合,药剂在细胞中扩散后,不致发生严重的毒害,这样纵裂为二的染色体不能向两极分开,因而便产生了染色体加倍的核。当药剂作用消除后,由于多倍体细胞继续分裂,便得到多倍体组织,以后则产生新的多倍体植株。

14.扼要叙述空气干燥法制片的步骤。

滴片后,不加热或任何处理,使载片在室温下自然干燥的方法。收集细胞—细胞经秋水仙素处理—低渗处理—离心—充分固定—滴片。(用吸管吸取细胞悬液自1m高处滴在冰冻的载玻片上,一片1-3滴,晾干,收存)

15.可用于常规核型分析的中期分裂相要具备哪些因素?

染色体清晰,数目为46条,大小合适,分散度合适,背景干净

16.人体外周血淋巴细胞培养中,植物血球凝集素(PHA)、秋水仙素、肝素钠和双抗分别有何作用?

外周血淋巴细胞是不能增殖的分化细胞群,在体外无菌培养条件下,若于培养基中植物凝集素(PHA)则可刺激处G。期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞,重新有丝分裂的能力,经一段时间的培养即可获得大量分裂期细胞以供染色体分析。 秋水仙素(或秋水酰胺)可通过干扰微管组装而抑制纺锤丝形成,使细胞分裂顺利进入后期而停滞于中期,从而可在短期内积累大量最适于进行染色体分裂中期分裂相。此外,秋水仙素还能使染色单体缩短、分开,使染色体呈现明显形而利于辨认。

肝素,主要起抗凝血作用

双抗,为防止培养时期细菌的污染

17.果蝇雌雄(成虫期)鉴别最主要或最准确的方法是什么?

最准确的是看性梳,性梳是雄果蝇的第二性征,雄果蝇的第一对前足的第一个跗节上,因形状与梳头的梳子非常相似,又与性别有关而得名。雌果蝇没有这个结构。但是性梳这一性状需要借助显微镜观察。

除了性梳之外,还有一些其它性状都可以用肉眼直接观察。具体如下: 雄蝇,个体较小,腹部条纹3(腹片4片),腹部末端圆钝,颜色深。 雌蝇,个体较大,腹部条纹5(腹片6片),腹部末端尖,颜色浅。

18.本学期我们做了哪些遗传学实验?通过这些实验你了解和掌握了哪些生物学基本实验技能?

本学期一共做了六次遗传学实验分别是:

1.植物细胞有丝分裂及染色体行为观察:通过本次试验掌握制作植物根尖有丝分裂装片的技术。

2.减数分裂制片及染色体行为观察:掌握减数分裂制片方法。

3.果蝇生活史及性状观察:掌握试验果蝇的饲养管理技术。

4.果蝇的唾液腺染色体制片及观察:掌握解剖果蝇幼虫、分离唾腺的方法,掌握唾腺染色体的制片技术。

5.植物多倍体激发、制片及观察:掌握了植物多倍体人工诱发技术及多倍体鉴定方法。

6.人体外周血淋巴细胞培养及制片:掌握了人体外周血淋巴细胞的悬浮培养法与人体细胞染色体标本的制备和核型分析的方法,学会了人体细胞遗传学实验的基本操作技术。

19.植物染色体制片时,我们使用的是什么染色液?人类染色体染色时我们使用的是何种染色液,如何配制?

植物染色体制片时使用的是改良苯酚品红染色液

人类染色体染色时我们使用的是吉姆萨染液(Giemsa),配臵:称Giemsa粉剂

1g臵研钵中,加少量甘油研磨至无颗粒为止,再加入甘油共50ml,放在56℃~60℃的温箱或水浴内12h,促使溶化。冷却后加入甲醇50ml,室温放臵2~3d后,过滤使用。同时将Giemsa原液1份加片pH7.4的磷酸缓冲液9份稀释,或在10ml磷酸缓冲液(pH7.4)中加入10~15滴Giemsa原液,应随用随配。

20.核型分析有何作用?

是细胞遗传学分析的基本方法:研究染色体形态、结构、功能的相互关系,可根据染色体数目变异判断病因。

核型分析对于人类医学遗传研究及临床应用都有重大意义。如肿瘤细胞的核型分析已被应用于肿瘤的临床诊断、愈后极药物疗效的观察;通过培养后的淋巴细胞或皮肤成纤维细胞的核型分析,可以对人的染色体疾病进行诊断,而对培养后的羊水中胎儿脱屑细胞或胎盘绒毛膜细胞的核型分析则可用于胎儿性别及是否患有染色体病的产前诊断。

21.微核检测有何作用?

微核试验在对外来化合物(如药品、食品添加剂、农药、化妆品、环境污染物等)遗传毒性和职业暴露人群遗传损害监测和现场生态环境检测方面,在诊断和预防肝癌、食管癌、肺癌等恶性肿瘤方面得到了大量的应用。微核试验最大的优点是经济、简单、快速,而国内外大量的对试验研究,比较一致的看法是该方法在敏感性、特异性和准确性方面,与经典的染色体畸变分析方法基本相当川。因而,特别适合作为大量化合物和现场人群初筛的实验方法。

22.当你进行果蝇性别鉴定时,果蝇苏醒了,你如何处理?

应迅速将果蝇放入麻醉瓶中继续麻醉

23.如何获得果蝇唾腺?过程中应注意哪些细节?

把载玻片放在双筒解剖镜下,其上滴上一滴生理盐水。取幼虫臵于生理盐水中,两手各握一枚解剖针,以左手的针压在幼虫末端1/3处,固定幼虫,右手的针尖压住幼虫头部,用适当的力向前拉,把头部和身体拉开,腺体即随之而出。 注意要一次把腺体拉出,防止拉到一半头部再缩回去。

24.果蝇麻醉使用何种试剂?使用中应注意哪些问题?如何判断果蝇死亡? 使用的是乙醚。

使用时应注意避免泄露,做麻醉瓶的时候将乙醚滴到麻醉瓶的棉花球上。 当果蝇翅膀外展45°时说明果蝇已经死亡。

25.双线期可以看到交叉,这种现象有何种遗传学意义?

增加变异种类、增加群体遗传多样性,是染色体上基因连锁和互换的细胞学基础。

11、在《遗传学实验》果蝇实验中要反复用到乙醚,乙醚不是易燃易爆的由美文导刊网(www.eorder.net.cn)收集整理,转载请注明出处!原文地址http://www.eorder.net.cn/news192666/

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